DIGITALNA ARHIVA ŠUMARSKOG LISTA
prilagođeno pretraživanje po punom tekstu
| ŠUMARSKI LIST 13/2011 str. 135 <-- 135 --> PDF |
M. Pernek, M. Županić, D. Diminić, T. Cech: VRSTE RODAPHYTOPHTHORA NABUKVI I TOPOLAMA... Šumarski list – Posebni broj (2011), 130-137 Molekularne analize Dobiveni izolati čiste kulture poslani su u referentne laboratorije na molekularne analize i determinaciju na razini vrste. Izolati iz Bjelovara poslani su u Hampton RoadsAgricultural Research and Extension Center (Virginia, SAD), dok su izolati iz Osijeka poslani u Bundesamt für Forst undWald u Beč (Austrija). Izolati su uzimani s kultura te su izravno obrađeni PCR metodom bez ekstrakcije DNK prema metodi Kong i sur. (2005). Na taj način omogućeno je odvajanjeviše izmiješanih individua, čime je smanjena mogućnost pogreške. Manja količina micelija uzimana je iz jedne kolonije s pipetom i dodana u PCR miksturu za REZULTATI I RASPRAVA– Uzroci sušenja stabala i otkrivene vrste iz roda Phytophthora amplifikaciju. PCR mikstura sastojala se od 10mM Tris-HCl, 5 mM KcCl, 1,5 mM MgCl2, 0,5 µM ITS-1 početnice, 0,2 mM d NTPi 0,5 dijelovaTaqDNK polimeraze (TaKaRa Mirus Biocorporation, Madison, SAD) (Kong i sur. 2005). Izravne PCRkolonije su pomoću ITS-1 početnice kombinirane sa SSCP(Kong i sur. 2003, Kong i sur. 2005) i korištene za determinaciju. Za PCR je korištena sljedeća početnica: uzvodno 5’-3’ GAAGGTGAAGTCGTAACAAGG te nizvodno 5’-3’ AGCGTTCTTCATCGATGTGC. Broj parova baza iznosio je oko 300. Results and discussion Na izolatima bukve i topola, nakon laboratorijskog razvoja izolata utvrđen je zaPhytophthorasp. specifičan rast micelija u petrijevim posudicama u laboratorijskim uvjetima (Slika 4.). Izolati su molekularno analizirani te je potvrđena prisutnost vrsta iz rodaPhytophthora. Slika 4. Koncentrični rast micelija izoliran sa stabala bukve Figure 4Concentric growth of mycelia isolated from beech trees Phytophthora vrste na topolama Prvi simptomi primijećeni su na topolama 2005. go- dine te su uzeti uzorci tla s korijenjem. Nakon laboratorijske obrade metodom potapanja izoliran je micelij, koji je po morfološkim obilježjima upućivao na vrste iz roda Phytophthora. Ti uzorci su poslani na molekularne analize te je utvrđeno da se radi o vrstamaPhytophthora cambivora (Petri) Buismani Phytophthora gonapodyides(H.E. Petersen) Buisman. Terenskim obilascima utvrđeno je da su prvi simptomi koji ukazuju na zarazu: osutost krošnje, kloroza i otpadanje lišća. Nakon toga u proljeće i ljeto na kori se formiraju tamne mrlje iz kojih se slijeva tamna teklina. Na tim mjestima se ispod kore nalaze rakaste tvorevine, koje obuhvaćaju kambijalno tkivočime prekidaju provodne elemente u stablu. Često dolazi i do raspucavanja kore od pridanka,i na tim mjestima se ispod kore nalaze crne lise koje sežu i do 7 metara u visinu, prosječne su širine 10 cm mjereno po obodu presjeka stabla i ulaze do 3 cm duboko u drvo. Bolest se širi koncentrično oko napadnutog stabla. Na korijenju napadnutih stabala utvrđene su nekroze,kao i na stablu i granama. Terenskim pregledom napadnutih odjela utvrđeno je da većina sušenja vezana za klon 275/81. Utvrđeni uzročnik bolestiP. cambivoraje kod nas već otprije poznata kao uzročnik tintene bolesti pitomog kestena (Glavaš 1999),dok se u Europi spominje kao uzročnik bolesti i na hrastovima i bukvi, no dosada nije opisivana kao vrsta koja napada topole. O sposobnostiutvrđenog uzročnika da se u povoljnim uvjetima naglo razvije i prouzroči velike štete govori i podatak, da je ova vrsta 20-tih godina prošloga stoljeća uzrokovala epifitociju tintene bolesti pitomog kestena u Italiji, Portugalu i Španjolskoj u kojoj je stradalo mnogo stabala (Brasier 1999). Vrste iz roda Phytophthtora većinom su slabi patogeni, ali kod promjena stanišnih uvjeta te narušavanja zdravstvenog stanja i vitaliteta stabala mogu vrlo brzo i ozbiljno ugroziti domaćina.Visoki stupanj prilagodljivosti je osobito opasan kod introdukcije novih vrsta iz udaljenih dijelova svijeta. Utvrđeno je također da vrlo često dolazi do istovremenog napada više vrsta iz ovog roda. Vrste unutar roda Phytophthoraprilagodljive su različi |