DIGITALNA ARHIVA ŠUMARSKOG LISTA
prilagođeno pretraživanje po punom tekstu
ŠUMARSKI LIST 11-12/2007 str. 29 <-- 29 --> PDF |
M. Ivanković: MOGUĆNOST INTROGRESIJE GENA KAVKASKE JELE (Abies nordmaniana /Steven/ Spach) . Šumarski list br. 11–12, CXXXI (2007), 529-537 Osnovni podaci o istraživanim provenijencijama ković 2003) koji su poslužili za uzorkovanje kao i pro( Uprava šuma, Šumarija) odakle je skupljano sjeme za venijenicjcje ee ko analizirane, a nema ih u pokusima, kojje ee s ssu uu anal osnivanje pokusa provenijencija (Gračan 2001, Ivan-prikazanii s ssu uu u uu tablici 1. Tablica 1. Osnovni podaci o istraživanim provenijencijama obične jele Table 1 Silver fir provenance datas Prov. prov P-1 P-2 P-3 P-4 P-5 P-6 P-7 P-8 P-9 P-10 P-11 P-12 P-13 P-14 Šumarija Forest office Našice, Voćin Požega, Kamensko Koprivnica, Ivanec Zagreb, Krapina Zagreb, Zagreb Ogulin, Josipdol Ogulin, Ogulin Delnice, Gomirje Delnice, Vrbovsko Delnice, Vrbovsko Delnice, Skrad Delnice, Skrad Delnice, Zalesina Delnice, Tršće Gosp. jedinica Management unit Djedovica -Trešnjevica 12c Zapadni Papuk II 32d Trakošćan 7d Macelj Bistranska gora 17b Alilovica 13b Josipovac 38b Potočine-Crna kosa 8b Gluhe Drage 8 Miletka 17b Rudač 2a Rudač la Belevine Rudnik 13a Prov. prov P-15 P-16 P-17 P-18 P-19 P-20 P-21 P-22 P-23 P-24 P-25 P-26 P-27 Za analizu mtDNA u ovom radu korištena je tehnika raznolikosti duljine umnoženih fragmenata. Cjelokupnu analizu mtDNA možemo podijeliti u tri glavna dijela: sakupljanje uzoraka, izolacija cjelokupne DNA i lančana reakcija polimerazom (PCR). Nakon uspješno prove Šumarija Forest office Senj, Novi Vinodolski Senj, Krasno Gospić, Otočac Split, Imotski Postojna Novo Mesto Gosp. jedinica Management unit Duliba 1 Nadžak bilo 15, 16 Rastovka 11 Biokovo 1 Mašun Crmošnjica, Podturen Analizirane populacije koje nisu zastupljene u pokusima provenijencija Gospić, Gospić Jadovno -Jazbine Gospić, Donji Lapac Lička Plješivica (S) Gospić, Korenica Lička Plješivica (S) Plitvička jezera Medveđak – Plitvički klanac Delnice, Fužine Brloško Gospić, Gračac Lička Plješivica (J) Gospić, Gračac Velebit dene lančane reakcije polimerazom dobiveni fragmenti razdvojeni su elektroforezom. Haplotipovi su određeni na osnovi razlike u veličini fragmenta, a svi navedeni postupci obavljeni su u Laboratoriju za molekularnu genetiku Šumarskog instituta, Jastrebarsko. Prikupljanje uzoraka – Sample colection Za kvalitetnu ekstrakciju DNA potreban je svjež materijal, budući da stanica sadržava brojne enzime koji se oslobađaju njezinim raspadanjem i razgrađuju DNA. Iz tog razloga materijal za analizu mtDNA većinom je sabran s pokusa provenijencija osnovanog u rasadniku Instituta, koji je zbog blizine laboratoriju najpogodniji. Provenijencije koje zbog nedostatka sadnica nisu bile zastupljene u pokusu A-polje, uzete su iz pokusa Brloško. Kako pokus provenijencija ne pokriva cjelokupni areal obične jele u Hrvatskoj, uzorkovanje provenijencija koje nisu zastupljene ni na jednom od pokusa obavljeno je u prirodnim populacijama na području četiri Šumarije Uprave šuma Podružnica Gospić i s područja NP Plitvička jezera. Od vremena sabiranja uzoraka do ekstrakcije DNA iz prirodnih populacija grane u dužini od 50 do 60 cm stavljene su u staklenke s vodom. Jedinke s kojih su uzeti uzorci obilježene su u pokusima i u prirodnim sastojinama. Udaljenost između stabala u sastojinama bila je najmanje 100 m, a od svake provenijencije skupljeno je po šest jedinki. Područje Šumarija Donji Lapac i Korenica predstavlja provenijenciju sjevernog dijela Ličke Plješivice te su sa svakog područja uzeta po tri uzorka. Uzorci iz šumskih sastojina analizirani su naknadno zajedno s nova tri uzorka provenijencije Macelj. Ukupno je analizirano 136 stabala obične jele, 126 iz Hrvatske i 10 iz Slovenije. Izolacija stanične deoksiribonukleinske kiseline Izolation of deoxyribonucleic acid (DNA) Ukupna stanična DNA ekstrahirana je iz iglica proljetnih izbojaka obične jele. Upotrijebljeno je 5–7 iglica po stablu, ovisno o njihovoj veličini. Iglice su stavljene u plastične epruvete od 2 ml i smrznute tekućim dušikom te zdrobljene pomoću sterilnih plastičnih štapića. Dobivenom prahu dodan je 1 ml ekstrakcijskog pufera (Tablica 2.). DNA molekule izolirane su protokolom prema Doyleu i Doyleu (1987). Dobivena otopina inkubirana je 60 minuta na 55 °C u inkubatoru uz povremeno protresanje. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu dodano je 400 ml diklormetana. Otopina je pažljivo izmiješana okretanjem epruvete, jer se u slučaju prejakog miješanja otopina nije mogla razdvojiti na faze. |