DIGITALNA ARHIVA ŠUMARSKOG LISTA
prilagođeno pretraživanje po punom tekstu
| ŠUMARSKI LIST 11-12/2004 str. 57 <-- 57 --> PDF |
D. Ballian: VARIJABILNOST MIKROSATELITNE DNK U POPULACIJAMA DIVLJE TREŠNJE .. Šumarski list br. 11-12, CXXVIII (2004), 649-654 Za PCR djelovanje učinjen je reakcijski volumen od 20ul za par Tablica 2. PCR procedura Table 2 PCR procedure početnica i prikazan u tablici 3, a procedura je trajala kao što je priVrsta temperature Type of the temperature Temperatura Temperature Vrijeme Time Broj krugova No. of circles kazano u tablici 2. početna temperatura 94 °C 2 min Nakon zavšene PCR procedure, razdvajanje PCR produkta izvršeno je elektroforezom na 1,5 % agarnom gelu (Ultra pure DNA grade agarose - Bio Rad). Kako se temperatura denaturacije temperatura hibridizacije temperatura elongacija završna temperatura temperatura čekanja 94 °C 55 °C 72 °C 72°C 4°C 1 min 1 min 1 min 8 min - 35 35 35 radi o specifičnim početnicama, nije bilo potrebe da se radi na poliakridamidnom gelu, Nakon elektroforeze bojenje gela izvršeno je ethi nego su vrpce izbrajane na agarnom gelu. Vrijeme podium bromideu koncentracije od 1 ug/ml, u trajanju od trebno za rad elektroforeze bilo je u zavisnosti od veli20 minuta. Potom je izvršeno snimanje gela i izbrajane čine gela, i kretalo se oko jednog sata pri istosmjernoj vrpci. struji od 50 ili 100V. Tablica 3. PCR standardni protokol Table 3 PCR standard protocol Protokol za broj uzoraka 1 7 11 15 19 21 Broj analiza 1 6 10 13 18 20 u ul U jLll u ul u ul U jLll U jLll H20 9,92 69,44 109,12 148,80 188,48 208,32 10 x Buffer 2,00 14,00 22,00 30,00 38,00 42,00 lOxdNTP´s 2,00 14,00 22,00 30,00 38,00 42,00 Početnica 1 1,00 7,00 11,00 15,00 19,00 21,00 Početnica 2 1,00 7,00 11,00 15,00 19,00 21,00 Taq 0,08 0,56 0,88 1,20 1,52 1,68 Otopina DNA 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 Ukupno 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 REZULTATI ISTRAŽIVANJA I RASPRAVA Istraživanja su pokazala da od četiri para početnica monomorfizam, iako je registrirana u ranijim istraživakoji su korišteni u ovim istraživanjima samo jedan par njima, ali na drugim vrstama iz roda Prunus (P persica pokazuje polimorfizam (Tab. 4.). U drugih parova poL.)( Ciprian i i sur. 1999). četnica nije registrirana varijabilnost, jer su pokazali Tablica 4. Frekvencije alela i heterozigotnost.kod svih uzoraka. Table 4 Frequency of the alels and heterozygosity in all samples Početnice Primers 1 Aleli (bp) Alleles (bp) 2 Heterozigoti Heterozygoty Vrpce Band Broj analiza No. ofanalisys UDP96-003 bp.149 1.00 0 0 Nema polimorfizma Jednostruka 70 UDP96-018 bp.240 1,00 0 0 Nema polimorfizma Jednostruka 70 UDP97-402 bp.139 0,57 bp.151 0,43 0,49 Dvostruka 126 UDP98-407 bp.136 1,00 0 0 Nema polimorfizma Jednostruk 70 bp. - parova baza Iz tih je razloga u ovom istraživanju varijabilnosti dobila očekivana heterozigotnost. Prosječna heterozi- DNK korištena početnica UDP 97-402, kod koje se gotnost za sve populacije iznosi 0,49 (Tab. 4.). Najveću 651 |